新型冠狀病毒（2019-nCoV） 抗原檢測(cè)試劑盒
注冊(cè)證號(hào)：國(guó)械注準(zhǔn)20223400361
注冊(cè)證號(hào)：國(guó)械注準(zhǔn)20223400361
實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)是新冠病毒核酸檢測(cè)的主要方法。每一個(gè)標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果都會(huì)以一張擴(kuò)增曲線圖呈現(xiàn)，需要檢驗(yàn)人員的“專業(yè)慧眼”去分辨，判斷出“陰性”還是“陽性”。然而在實(shí)際操作中，核酸擴(kuò)增曲線并非次次“完美”，易受到多種因素影響。因此如何判讀擴(kuò)增曲線，對(duì)準(zhǔn)確報(bào)告新冠核酸檢測(cè)結(jié)果至關(guān)重要。
正常擴(kuò)增曲線長(zhǎng)啥樣？
正常擴(kuò)增曲線呈S型，分為基線期、指數(shù)起始期、指數(shù)擴(kuò)增期和平臺(tái)期，且要求拐點(diǎn)清楚，整體平行性好，基線平而無上揚(yáng)現(xiàn)象。
異常擴(kuò)增曲線解析
異常擴(kuò)增曲線是核酸檢測(cè)人員最為頭疼的問題。辨別擴(kuò)增曲線形態(tài)、分析產(chǎn)生異常擴(kuò)增曲線的原因是檢測(cè)人員的必備技能。每一條擴(kuò)增曲線的判讀需要慧眼識(shí)別和經(jīng)驗(yàn)處理。我們總結(jié)了檢測(cè)過程中遇到過的異常擴(kuò)增曲線，與大家進(jìn)行分享。
01 內(nèi)標(biāo)擴(kuò)增曲線異常
正常的內(nèi)標(biāo)擴(kuò)增曲線是實(shí)驗(yàn)有效性的基礎(chǔ)，可反映樣本質(zhì)量、抽提和擴(kuò)增效率。
【曲線特點(diǎn)】：
【類型一】某標(biāo)本內(nèi)標(biāo)無S型擴(kuò)增曲線。
【類型二】外源性內(nèi)標(biāo)呈離散型曲線。
【原因分析】：
a) 標(biāo)本采樣欠佳，沒有刮取到足夠的鼻咽部細(xì)胞。
b) 標(biāo)本保存不當(dāng)，核酸降解。
c) 標(biāo)本加錯(cuò)位置或漏加。
d) 提取失?。毫呀庖何椿靹颍ㄍ庠葱詢?nèi)標(biāo)）、提取儀故障等。
e) 擴(kuò)增失?。郝┘臃磻?yīng)液、模板加錯(cuò)孔位、混入抑制擴(kuò)增反應(yīng)的干擾物等。
【解決方案】：
a) 重新采集樣本。
b) 送檢標(biāo)本及時(shí)檢測(cè)，室溫放置不超過4h。
c) 按照規(guī)范化流程進(jìn)行相關(guān)操作。
d) 定期對(duì)在崗人員進(jìn)行操作考核。
【注】?jī)?nèi)標(biāo)擴(kuò)增曲線異常，則該批或相應(yīng)標(biāo)本結(jié)果無效，需重新采樣或重新檢測(cè)。
02 基線設(shè)定不當(dāng)?shù)漠惓U(kuò)增曲線
【曲線特點(diǎn)】：
軟件默認(rèn)基線設(shè)定的擴(kuò)增曲線呈波浪型，導(dǎo)致Ct值偏大，可能會(huì)被誤判為陰性。
【原因分析】：
軟件默認(rèn)基線設(shè)定不準(zhǔn)確造成擴(kuò)增曲線異常。
【解決方案】：
根據(jù)檢測(cè)試劑的要求設(shè)定適宜的基線。
03 軟件優(yōu)化造成的異常擴(kuò)增曲線
【曲線特點(diǎn)】：
軟件優(yōu)化后擴(kuò)增曲線向斜上方抬起，導(dǎo)致Ct減小，根據(jù)優(yōu)化后擴(kuò)增曲線會(huì)誤判為陽性，但原始信號(hào)未有明顯擴(kuò)增。
【原因分析】：
根據(jù)設(shè)定基線，軟件在自動(dòng)優(yōu)化擴(kuò)增曲線時(shí)會(huì)放大微小異常信號(hào)。
【解決方案】：
查看原始曲線，對(duì)基線稍作調(diào)整。
【注】自動(dòng)優(yōu)化軟件會(huì)放大微小的異常信號(hào)，可根據(jù)原始曲線判斷信號(hào)真假。
04 多個(gè)標(biāo)本單靶標(biāo)通道翹尾
【曲線特點(diǎn)】：
多個(gè)標(biāo)本出現(xiàn)單靶標(biāo)通道的擴(kuò)增曲線翹尾。
【原因分析】：
a) 反應(yīng)液配制后保存不當(dāng)，如熒光探針斷裂。
b) 存在陽性質(zhì)控污染或者其他熒光物質(zhì)污染。
c) 擴(kuò)增試劑/耗材的批間差異導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加（如試劑更新后Mg2+濃度過高）。
【解決方案】：
a) 按照說明書要求保存配制的擴(kuò)增反應(yīng)液。
b) 提取得到的核酸應(yīng)及時(shí)進(jìn)行后續(xù)處理，否則及時(shí)封蓋，避免混入陽性質(zhì)控或其他干擾物；實(shí)驗(yàn)室每天按時(shí)清潔消毒以消除潛在的干擾因素。
c) 試劑/耗材批號(hào)更換前應(yīng)進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
05 靶標(biāo)通道呈低平S型曲線
【曲線特點(diǎn)】：
標(biāo)本靶標(biāo)通道呈低平且非典型S型擴(kuò)增曲線，標(biāo)本與弱陽性質(zhì)控的熒光強(qiáng)度存在顯著差異。
【原因分析】：
a) 標(biāo)本存在干擾物質(zhì)。
b) 提取純化不完全。
【解決方案】：
標(biāo)本重新檢測(cè)，必要時(shí)可使用不同的檢測(cè)試劑進(jìn)行確認(rèn)。
【注】對(duì)疑似標(biāo)本建議使用不同的檢測(cè)試劑進(jìn)行確認(rèn)。在異常擴(kuò)增曲線判斷時(shí)，應(yīng)根據(jù)整批標(biāo)本的擴(kuò)增情況（弱陽性質(zhì)控?cái)U(kuò)增曲線）綜合判斷。
06 蒸發(fā)引起的異常擴(kuò)增曲線
【曲線特點(diǎn)】：
反應(yīng)體系蒸發(fā)，終體積減少，熒光強(qiáng)度產(chǎn)生變化導(dǎo)致陰性擴(kuò)增曲線整體呈斜向上或山域型。
【原因分析】：
a) 在擴(kuò)增過程中因熱蓋導(dǎo)致管蓋爆裂/光學(xué)膜破裂。
b) 未蓋緊管蓋/刮緊光學(xué)膜。
c) 未使用配套/質(zhì)量合格的耗材。
【解決方案】：
a) 定期檢查擴(kuò)增儀狀態(tài)，確保熱蓋溫度正常。
b) 上機(jī)前蓋緊管蓋/刮緊光學(xué)膜。
c) 使用廠商推薦的合格擴(kuò)增耗材。
d) 調(diào)整基線可適當(dāng)糾正蒸發(fā)引起的異常信號(hào)，有助于后續(xù)的擴(kuò)增曲線判讀。
07 氣泡引起的異常擴(kuò)增曲線
【曲線特點(diǎn)】：
擴(kuò)增曲線出現(xiàn)劇烈或明顯曲折。
【原因分析】：
反應(yīng)體系內(nèi)有大氣泡形成折射，干擾熒光的采集。
【解決方案】：
a) 加樣時(shí)減少氣泡的產(chǎn)生，同時(shí)上機(jī)前可通過離心減少氣泡。
b) 調(diào)整基線可適當(dāng)糾正氣泡引起的異常信號(hào)，有助于后續(xù)的擴(kuò)增曲線判讀。
08 鋸齒形異常擴(kuò)增曲線
【曲線特點(diǎn)】：
所有通道的擴(kuò)增曲線出現(xiàn)鋸齒狀。
【原因分析】：
擴(kuò)增儀電壓不穩(wěn)、采光或者濾光片故障。
【解決方案】：
檢查擴(kuò)增儀電壓和光路系統(tǒng)，及時(shí)排除硬件故障，防止后續(xù)檢測(cè)的異常結(jié)果。若擴(kuò)增儀故障嚴(yán)重影響擴(kuò)增曲線判讀時(shí)應(yīng)重新檢測(cè)。
總結(jié)
新冠核酸檢測(cè)過程中每一個(gè)環(huán)節(jié)的操作都有可能產(chǎn)生異常擴(kuò)增曲線，干擾結(jié)果判讀。檢測(cè)人員在上崗前需完成操作培訓(xùn)和考核，在實(shí)際工作中嚴(yán)格遵循規(guī)范化流程，掌握專業(yè)知識(shí)，積累實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，才能保證新冠核酸的檢測(cè)質(zhì)量。
注冊(cè)證號(hào)：國(guó)械注準(zhǔn)20223400361